定血样品于37℃循环浸提

2 结果与讨论

2.1 浸提溶剂的高效选择

双酚A易溶于甲醇、乙醇、液相荧光液透丙酮、色谱苯等有机溶剂，法测酚难溶于水。定血样品于37℃循环浸提，析器甲醇、中双丙酮的溶出沸点低于乙醇、苯（毒性较大），高效有利于样品浸提液浓缩处理；丙酮沸点虽较甲醇低，液相荧光液透但样品不耐受丙酮。色谱因此选择甲醇作为替代溶剂模拟临床使用对双酚A进行加严浸提。法测酚

2.2 检测波长的定血优化

采用高效液相色谱荧光法对双酚A标准溶液的激发波长（210～300nm）及发射波长（280～400nm）进行光谱扫描。结果表明，析器双酚A的中双最佳激发波长和发射波长分别为232、314nm。

2.3 样品预处理方式的选择

取血液透析器端盖及外壳部分剪成小块样品，以甲醇为浸提溶剂，按照1g样品-10mL甲醇的比例浸提，分别采用超声和振荡两种方式浸提。采用甲醇对样品进行10、20、30min超声浸提，分别超声浸提3次，试验结果表明三次超声浸提均未达到极限浸提。另将样品于控制型控温摇床振荡（37℃，200r/min）浸提5、24h，测得浸提液中双酚A的浓度分别为8.58、27.58ng/mL，说明双酚A的溶出量随浸提时间的增加而增加。

通过上述试验表明超声浸提及振荡浸提时样品中双酚A均不能达到极限浸提，无法准确测定样品中双酚A的残留量，故采用模拟临床使用的方式进行样品预处理。

2.4 专属性试验

分别取空白供试液、双酚A对照品溶液及样品供试液，按照1.3色谱条件进行测定。试验结果表明，双酚A对照品的保留时间约为21.5min，样品供试液中双酚A的保留时间与双酚A对照品的保留时间基本一致。双酚A的色谱峰峰形良好且与邻近色谱峰分离度均大于1.5，空白供试液及样品供试液对本实验分析均无干扰，满足试验要求，方法专属性良好。双酚A对照品溶液色谱图见图3

2.5 线性方程、检出限与定量限

按照1.3色谱条件测定1.2配制的双酚A系列标准工作溶液，以双酚A的质量浓度（x，ng/mL）为横坐标，以色谱峰面积（y）为纵坐标，绘制标准工作曲线。计算得到双酚A在质量浓度为51.2～1024ng/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好，线性回归方程为y=0.0652x-0.7942，线性相关系数为0.9999。

用甲醇稀释1.2配制的双酚A标准储备液并进行测定，以3倍的信噪比（S/N）计算检出限，10倍的S/N计算定量限，得到该方法下双酚A的检出限与定量限分别为10.8、51.2ng/mL。

2.6 加标回收与精密度试验

在样品浸提液基质中分别添加低、中、高浓度的双酚A标准溶液，精密量取样品加标浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，涡旋至残渣完全溶解，用0.45μm滤膜过滤，得样品加标供试液。3个加标水平分别为51.50、103.0、206.0ng/mL，每个加标水平平行测定6次，结果见表2。由表2可知，双酚A在3个浓度水平的平均加标回收率为90.23%～104.21%，相对标准偏差为0.8318%～3.661%，表明该方法的准确度及精密度良好，均符合《中国药典》2020版9101分析方法验证指导原则中的指标要求。

2.7 样品测定

采用本方法对血液透析器平行测定三组，将测定结果代入式(1)，计算其临床接触量，结果见表3。

式中：W—每套样品中双酚A临床接触量，μg；

           c—样品供试液中双酚A质量浓度，ng/mL。

由表3结果可知，每套血液透析产品中双酚A的最大临床接触量为1.386μg。根据GB/T16886.17—2005《医疗器械生物学评价　第17部分：可沥滤物允许限量的建立》对血液透析器中双酚A允许限量进行评估，本方法对血液透析器中双酚A的测定值在允许限量范围内。

3 结语

建立了血液透析器中双酚A的浸提方法，采用高效液相色谱荧光法测定血液透析器中双酚A的溶出量。该方法专属性强、灵敏度高、精密度及准确度好，可用于血液透析器安全性风险评估，为监管部门提供技术支持。

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